GB/T 8622-2006 飼料用大豆制品中尿素酶活性的測(cè)定

范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大豆制品及其副產(chǎn)品中尿素酶活性的測(cè)定。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于大豆、由大豆制得的產(chǎn)品和副產(chǎn)品中尿素酶活性的測(cè)定。此方法可了解大豆制品的濕熱處理程度。

術(shù)語(yǔ)和定義
下列術(shù)語(yǔ)和l定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
大豆制品中尿素酶活性  urease activity soya bean products
在30°C±0.5°C和pH7的情況下，每克大豆制品每分鐘分解尿素所釋放的氨基氮的質(zhì)量。
注: 以尿素酶活性單位每克(U/g)表示。

原理
將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30°C±0.5°C下精.確保溫30min，尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng)。用過(guò)量鹽酸中和所產(chǎn)生的氨，再用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴。

儀器設(shè)備
粉碎機(jī): 粉碎時(shí)應(yīng)不生強(qiáng)熱。
樣品篩: 孔徑200μm。
分析天平: 感量: 0.1mg。
恒溫水浴: 可控溫30°C±0.5°C。
計(jì)時(shí)器。
酸度計(jì): 精度0.02，附有磁力攪拌器和滴定裝置。
實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器。

試劑和溶液
試劑為分析純，水應(yīng)符合 GB/T 6682 的規(guī)定。
尿素緩沖溶液(pH7.0±0.1)
稱取8.95g磷酸氫二鈉Na₂HPO₄•12H₂O)，3.40g磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)溶于水并稀釋至1000mL，再將30g尿素溶在此緩沖液中，有效期1個(gè)月。
鹽酸溶液[c(HCl)=0.1mol/L]
移取8.3mL 鹽酸，用水稀釋至1000mL。
氫氧化鈉溶液[c(NaOH)=0.1mol/L]
稱取4g氫氧化鈉溶于水并稀釋至1000mL，按 GB/T 601 規(guī)定的方法配制和標(biāo)定。
甲基紅、溴甲酚綠混合乙醇溶液
稱取0.1g甲基紅，溶于95%乙醇并稀釋至100mL，再稱取0.5g溴甲酚綠，溶于95%乙醇并稀釋至100mL，兩種溶液等體積混合，儲(chǔ)存于棕色瓶中。

試樣的制備
用粉碎機(jī)將具有代表性的樣品粉碎，使之全部通過(guò)樣品篩。對(duì)特殊樣品(水分或揮發(fā)物含量較高而無(wú)法粉碎的樣品)應(yīng)先在實(shí)驗(yàn)室溫度下進(jìn)行預(yù)干燥，再進(jìn)行粉碎，當(dāng)計(jì)算結(jié)果時(shí)應(yīng)將干燥失重計(jì)算在內(nèi)。

測(cè)定步驟
稱取約0.2g制備好的試樣，精.確至0.1mg，于玻璃試管中(如活性很高可稱0.05g試樣)，加入10mL尿素緩沖液，立即蓋好試管蓋劇烈振搖后，將試管馬上置于30°C±0.5°C恒溫水浴中，計(jì)時(shí)保持30min±10s。要求每個(gè)試樣加入尿素緩沖液的時(shí)間間隔保持一致。停止反應(yīng)時(shí)再以相同的時(shí)間間隔加入10mL鹽酸溶液，振搖后迅速冷卻至20°C。將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入小燒杯中，用20mL水沖洗試管數(shù)次，以氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液用酸度計(jì)滴定至pH4.70。如果選擇用指示劑，則將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入250mL錐形瓶中加入8滴~10滴混合指示劑，以氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈藍(lán)綠色。
另取試管作空白試驗(yàn)。稱取約0.2g 制備好的試樣精.確至0.1mg，于玻璃試管中(如活性很高可稱0.05g試樣)，加入10mL鹽酸溶液，振搖后再加入10mL尿素緩沖液，立即蓋好試管蓋劇烈振搖，將試管馬上置于30°C±0.5°C恒溫水浴中，計(jì)時(shí)保持30min±10s。停止反應(yīng)時(shí)將試管迅速冷卻至20°C。將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入小燒杯中，用20mL水沖洗試管數(shù)次，以氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液用酸度計(jì)滴定至pH4.70。如果選擇用指示劑，則將成管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入250mL錐形瓶中加入8滴~10滴混合指示劑，以氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈藍(lán)綠色。

結(jié)果計(jì)算
大豆制品中尿素酶活性X，以尿素酶活性單位每克(U/g)表示，按式(1)計(jì)算。若試樣經(jīng)粉碎前的預(yù)干燥處理后，則按式(2)計(jì)算:

式中:
X 一一試樣的尿素酶活性，單位為活性單位每克(U/g)；
c  一一氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；
V₀一一空白消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積，單位為毫升(mL)；
V  一一試樣消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積，單位為毫升(mL)；
14一一氮的摩爾質(zhì)量，M(N₂)=14g/mol；
30一一反應(yīng)時(shí)間，單位為分鐘(min)；
m 一一試樣質(zhì)量，單位為克(g)；
S  一一預(yù)干燥時(shí)出樣失重的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。
計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。
重復(fù)性: 同一分析人員用相同分析方法，同時(shí)或連續(xù)兩次測(cè)定活性≤0.2時(shí)結(jié)果之差不超過(guò)平均值的20%，活性>0.2時(shí)結(jié)果之差不超過(guò)平均值的10%，結(jié)果以算術(shù)平均值表示。


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